Признаки, основанные на различиях в элюции

Признак Е — основан на различиях в элюции штаммов энтеро-вирусов с сорбентов. Фракционирование вируса на различных сорбентах было предложено первоначально в качестве метода очистки и концентрации энтеровирусов. Для этой цели в разные годы применяли амберлит (Lo Grippo, Berger, 1952), ДЭАЭ-целлюлозу (Ormbesee, Hoyer, 1958; Hoyer et al., 1958), фосфат кальция (Taverne et al., 1958), гели гидроокиси алюминия и фосфата алюминия (May, Shu, 1961; Fantes, 1962), эктеолцеллюлозу (Schmidt, 1963). Позже некоторые из этих методов применяли для дифференциации штаммов полиовируса по хроматографическому поведению.

Вирулентные и аттенуированныо штаммы полиовируса различаются по способности к адсорбции и элюции с ДЭАЭ-целлюлозы. Вирулентные штаммы почти не связывались с ионообменником и поэтому выделялись в буферных фракциях низкой ионной силы при нейтральном рН. В противоположность этому ат-генуированные штаммы прочно связывались с сорбентом и могли быть элюированы только фосфатным буферным раствором высокой ионной силы при щелочном рН. К сожалению, вирулентные и аттенуированные варианты полиовируса типа III одинаково легко отделялись от ионообменника при элюции растворами низкой ионной силы. Применение для элюции раствора хлорида натрия не позволяло выявить каких-либо различий в элюции аттенуированных и вирулентных штаммов полиовируса.

Детальное изучение особенностей хроматографического поведения штаммов полиовируса на колонках с ДЭАЭ-целлюлозой было проведено В. И. Аголом и соавт. (1962, 1962а) и С. В. Мас-ловой и В. И. Аголом (1966). По их мнению, наблюдающиеся различия в основном зависят от особенностей физико-химических свойств поверхности вириона, детерминированных вирусным геномом (В. И. Агол и др., 1962). Авторы показали, что основная масса вируса элюировала с колонки в виде гомогенного пика, но осе же в каждой фракции обнаруживалось какое-то количество вируса. В дальнейшем удалось из популяции штаммов Магоней и LSc 2ab выделить варианты, связывавшиеся с сорбентом менее прочно, чем основная масса частиц. У выделенных вариантов произошло отчетливое изменение хроматографических профилей при сохранении их антигенной специфичности. Степень адсорбции на ДЭАЭ-целлюлозе изменялась в присутствии L-цистина, тиогликолата натрия и меркаптоэтанола. Способность полиовируса образовывать бляшки под агаром со сниженной концентрацией бикарбоната натрия (признак d+) и легкая элюция с ДЭАЭ-целлюлозы (признак Е+) связаны с единичной мутацией (Воеуе, 1961, 1963).

Сходным образом аттенуированные штаммы полиовируса прочнее, чем вирулентные, удерживаются гелем гидроокиси алюминия. Наиболее четкие данные также были получены с полиовирусом типа I. Менее определенные различия выявлялись для штаммов типов II и III, причем для штаммов типа III наблюдалась обратная зависимость — элюция вакцинного штамма происходила при более низких концентрациях, чем дикого (Woods, Robbins, 1961; Haas et al., 1961; Thomssen et al., 1961; Thomssen, Maas, 1962). Последовательным фракционированием штаммов на ДЭАЭ-целлюлозе и затем на гидроокиси алюминия установили, что штаммы, ведущие себя одинаково на ДЭАЭ-целлюлозе, отличались в хроматографическом отношении при исследовании на гидроокиси алюминия.