Признак rct4o или признак t

Признак rct4o или признак t, пониженная способность аттенуированных штаммов размножаться при 40°С (Lwoff, Lwoff, 1958, 1959; Sabin, Lwoff, 1959). Этот признак определяется методом параллельного титрования при 35—37° и 40—41°С в пробирочных культурах клеток обезьяньих почек, клеток KB, HeLa или методом бляшек. В широких практических исследованиях этот показатель можно выразить в виде разницы титров вируса при 37° и 40°С. При этом разница в 5 lg ТЦД50 или больше свойственна штаммам rct40-, разница в 2 lg или меньше — rct40+. Некоторые исследователи предпочитают пользоваться показателем, определяемым путем деления эффективности размножения данного штамма при температуре 40°С по сравнению с 37°С на эффективность размножения при этих условиях аттенуированного штамма. Для признака rct4o – это отношение превышает 0,75, для признака rct4o+ оно меньше 0,29. Промежуточные значения свойственны признаку rct4o±.

Механизм влияния повышенной температуры па размножение вируса неясен. Lwoff (1959) показал, что адсорбция вирулентных
и аттенуированных штаммов происходит одинаково при температуре 35° и 40°С. Разница выявлялась лишь на стадии внутриклеточного размножения вируса. По мнению Lwoff, существенное значение имеют изменения обмена, наступающие при культивировании клеток при 40°С. Эти изменения, вероятно, носят преходящий характер, так как если культуру клеток KB, хранившуюся в течение 3 дней при температуре 40°С, инкубировать затем при 35°С, вакцинный вирус будет свободно в ней размножаться. По-видимому, РНК штаммов с признаком rct4cT хуже синтезируется в клетках при температуре 40°С.

10. 3. Гендон (1966), Ю. 3. Гендон и Н. А. Бабушкина (1966) установили, что у двух rct4o–мутантов нарушение репликации РНК связано с изменениями конфигурации в самой молекуле РНК: она не синтезировалась в присутствии РНК-полимеразы, образованной при участии генома вируса-помощника. В другом случае РНК-полимераза не появлялась даже при снижении температуры до 36°С на 30 мин после инкубации в течение 37г ч при 40°С.

Было высказано предположение, что неспособность штаммов размножаться при повышенной температуре может быть связана € различными функциональными нарушениями, в основе которых лежат дефекты разных локусов. Часть таких нарушений фенотипически компенсируется в присутствии в среде размножения окиси дейтерия (Koprowski et al., 1960; Carp et al., 1960; Lwoff, Lwoff, 1960). Такая компенсация, по-видимому, достигается тем, что при неразрешающих температурных условиях не образуется достаточно прочных водородных связей, безусловно необходимых для правильной копформации каких-то вирусных продуктов. Эти связи становятся более прочными в присутствии дейтерия, что  ведет  к  достижению  нужной  конформации  и  связанной  с ней   функциональной   активности   вирусных   продуктов    (Lwoffr 1962).

Компенсация дефектной функции термочувствительного мутанта (ts-мутанта) происходила при одновременном размножении в клетке другого мутанта, у которого данная функция была сохранена, а отсутствие размножения при повышенной температуре было связано с другими нарушениями. Это явление, названное «спасением фенотипа» (или «спасением маркера»), показывает, что чувствительность штаммов к размножению при повышенной температуре может определяться различными дефектами (Cooper, 1965). Генетический признак полиовируса — неспособность штамма размножаться при повышенной температуре — имеет низкую частоту спонтанных мутаций (Carp, 1963). Было установлено, что ts-мутанты можно получить при воздействии 5-фторурацила (Cooper, 1964).

Меньше данных имеется в отношении признака rct4o У вирусов Коксаки и ECHO. Г. А. Королева, М. П. Фролова и соавт. (1972) показали, что штаммы вируса Коксаки А 7 с признаками rct4o+ были высоконейровирулентными для обезьян и взрослых хлопковых крыс и обладали выраженным миотропизмом, а штаммы с характеристикой rct4o – были апатогепными. Аекоторые естественно циркулирующие и лабораторные высоковирулентные штаммы вирусов Коксаки А7 и 16 могут иметь характеристику rct4o . По данным Н. Н. Яворовской и соавт. (1972), все штаммы вирусов Коксаки А13 и 18 вне зависимости от их происхождения имеют характеристику rct4o+.

Противоположные данные были получены при изучении патогенности для новорожденных белых мышей «горячих» и «холодных» мутантов вируса Коксаки В6 (Sidorwojtowich, Jablonsky, 1970). В этом случае, в противоположность полиовирусам, патогенностью обладали лишь «холодные» мутанты, не способные размножаться при 40°С. Пассирование при 40°С приводило к потере ими патогенных свойств.

С. Р. Йыкс и А. А. Саарв (1972) показали, что признак rct4o может изменяться при использовании разных культур ткани: различия выявлялись между разными штаммами вирусов Коксаки В5, ECHO 11 и полиовируса типа I в культурах НЕр-2 и FL и не выявлялись в культуре клеток фибробластов эмбриона человека, в которых все изученные штаммы энтеровирусов имели сходную характеристику — rct40f.