Бляшкообразование

Многие энтеровирусы образуют в восприимчивых культурах под слоем агара бляшки — округлые прозрачные пятна на розоватом фоне.

Метод бляшек был предложен для вирусологических исследований Dulbecco (1952) и претерпел ряд модификаций, касающихся состава питательного покрытия и соотношения между составляющими его компонентами. Культуры для работы методом бляшек сажают в стеклянные или пластмассовые флаконы вместимостью 30—100 мл с пробкой или завинчивающимся колпачком. В некоторых лабораториях работают на культурах в небольших чашках Петри, которые помещают в термостат с атмосферой из смеси воздуха и углекислого газа.

Во избежание фотодинамического действия на культуры индикатора нейтрального красного их следует инкубировать в темноте (целесообразно закрывать флаконы плотной тканью или клеенкой). Полиовирусы, вирусы ECHO 7, 8 и 12 вызывают образование круглых бляшек с четкими границами. Для вирусов Коксаки В и для большинства вирусов ECHO характерно более замедленное образование круглых бляшек с размытыми краями. Бляшки, вызванные вирусом Коксаки А7 и энтеровирусом типа 71, бывают крайне мелкие (1—2 мл), а образованные вирусом Коксаки А9 имеют в центре сохранившиеся клетки и нечеткие края.

Г. А. Королева и др. (1968—1969) не наблюдали увеличения размеров бляшек, вызываемых вирусом АБ IV — Коксаки А7 при добавлении ДЭАЭ-декстрана (до 100 мг/мл). Soda (1971) при изучении бляшкообразования 14 штаммами вируса Коксаки А7 показал, что 3 из них оказались способными вызывать как мелкие, так и крупные бляшки, а остальные — только мелкие. Как крупные, так и мелкие бляшки увеличивались в размере при добавлении ДЭАЭ-декстрана (2-106) и протамин сульфата 2000. Из исходного штамма АБ IV КХ были получены две линии — менее стабильного крупнобляшечного варианта и более стабильного мелкобляшечного. Эти варианты не отличались друг от друга по скорости размножения в культурах клеток обезьяньих почекг по серологическим свойствам и по патогенности для новорожденных белых мышей.

В однослойных культурах почек павианов гамадрилов наблюдается бляшкообразование при заражении вирусами ECHO типов 1—8, 11—27, 29, 30 и 32, причем бляшкв, вызываемые разными типами энтеровирусов, различаются по размерам и виду (Mestro-yanni-Korkolopoulo, Maurin, 1970). Существенная трудность при работе с методом бляшек зависит от наличия в агаре ингибиторов типа сульфированных полисахаридов, угнетающих размножение некоторых штаммов (В. И. Агол, М. Я. Чумакова, 1961, 1962; Takemori, Nomura, 1960; Takemoto, Liebhaber, 1961). Ингибирующее их действие можно преодолеть путем добавления в покрытие ДЭАЭ-декстрана или применения вместо агара очищенной от этих веществ агарозы. De Maeyer, Schonne (1964) установили, что в качестве покрытий для получения бляшек энтеровирусов целесообразно применять метилцеллюлозный и крахмальный гели. Эти покрытия оказались наиболее эффективными для титрования вирусов ECHO 3, 4, Коксаки В1, В2, В5, В6. Они образовывают в 3—20 раз больше бляшек, чем под агаровым покрытием, что позволяет получать титры этих вирусов, близкие к титрам, определяемым по цитопатическому действию и превышающие титры под агаром на 0,3—1,4 lg БОЕ/0,1 мл (А. В. Булатов, 1967, 1967а). Под метилцеллюлозным покрытием были получены также бляшки вируса АБ IV (Soda, 1971). Как первичные культуры тканей почек обезьян, так и перевиваемые линии клеток хорошо переносят метилцеллюлозный и крахмальный гели. А. В. Булатов предложил упрощенную методику приготовления крахмального покрытия с использованием отечественного растворимого (гидролизованного) крахмала.

Tags: